猿痘ウイルスリアルタイム PCR キット

1.サンプルコレクション：検体は以下に従って滅菌チューブに採取する必要があります。

標準的な技術仕様を備えています。

2. 試薬の準備（試薬準備エリア）

キットのコンポーネントを取り出し、スタンバイ使用のために室温でバランスをとります。

3. 検体処理（検体処理エリア）

3.1 核酸抽出

ウイルス DNA 抽出キットの対応する要件と手順に従って、核酸抽出用に 200μL の液体サンプル、ポジティブコントロールおよびネガティブコントロールを採取することをお勧めします。

3.2 凍結乾燥粉末の溶解とテンプレートの添加

サンプル数に応じて、サル痘ウイルス凍結乾燥プレミックスを調製します。1 つのサンプルには、凍結乾燥プレミックス粉末を含む 1 本の PCR チューブが必要です。ネガティブコントロールとポジティブコントロールは 2 つのサンプルとして扱う必要があります。

(1) 凍結乾燥プレミックスを含む各 PCR チューブに溶解液 15 μL を加え、抽出サンプル/ネガティブ コントロール/ポジティブ コントロール 5 μL を各 PCR チューブにそれぞれ加えます。

(2) PCR チューブをしっかりと覆い、凍結乾燥粉末が完全に溶解して混ざるまで手で PCR チューブをはじき、瞬間低速遠心分離により液体を PCR チューブの底に集めます。

(3) 検出に一般的なリアルタイム PCR 装置を使用する場合は、PCR チューブを増幅エリアに直接移します。検出に BTK-8 を使用する場合は、次の操作を実行する必要があります。PCR チューブから BTK-8 の反応チップウェルに 10 μL の液体を移します。1 本の PCR チューブはチップ上の 1 つのウェルに対応します。ピペット操作中は、ピペットが 90 度垂直になっていることを確認してください。エアロゾル バリア ピペット チップは、適度な力でウェルの中心に配置し、最初のギアに達した時点でピペットを押すのを止めます (泡を避けるため)。ウェルが満たされた後、すべてのウェルを覆うように反応チップのメンブレンを取り出し、チップを増幅検出エリアに移します。

4. PCR増幅（検出領域）

4.1 PCR チューブ/反応チップを反応タンクに入れ、各反応ウェルの名前を対応する順序で設定します。

4.2 検出蛍光の設定：（1）サル痘ウイルス（FAM）。(2) 内部統制 (CY5)。

4.3 次のサイクリング プロトコルを実行します。

ABI7500、Bio-Rad CFX96、SLAN-96S、QuantStudio のプロトコル:

 BTK-8のプロトコル:

5. 結果分析（装置のユーザーマニュアルを参照してください）

反応後、結果は自動的に保存されます。「分析」をクリックして分析すると、機器は結果列の各サンプルの Ct 値を自動的に解釈します。ネガティブコントロール及びポジティブコントロールの結果は、下記「6.品質管理」に準拠するものとする。

6. 品質管理

6.1 ネガティブコントロール: FAM チャネルでは Ct なし、または Ct>40、正常な増幅曲線を持つ CY5 チャネルでは Ct≤40。

6.2 陽性コントロール: 正常な増幅曲線を持つ FAM チャネルでは Ct ≤ 35、正常な増幅曲線を持つ CY5 チャネルでは Ct ≤ 40。

6.3 上記の基準がすべて満たされている場合、結果は有効です。それ以外の場合、結果は無効になります。

結果の解釈

次のような結果が考えられます。

注記: 無効な結果が発生した場合は、サンプルを収集して再度テストする必要があります。